简化基因组dna甲基化测序技术流程图,甲基化测序的原理

简化基因组dna甲基化测序技术流程图,甲基化测序的原理

简化基因组甲基化测序(Reduced Representation Bisulfite Sequencing, RRBS) 是通过限制性酶切的⽅法富集基因组DNA 上富含CCGG 位点的⽚段，经Bisulfite 处图1:DNA甲基化方法的发展演变液相色谱(LC)是第一个用于定量DNA样品中总5-甲基脱氧胞苷(5mdC)含量的全基因组DNA甲基化平台，基本上DNA样品被DNase、碱性磷酸酶和

全基因组甲基化测序技术通过T4-DNA连接酶，在超声波打断基因组DNA片段的两端连接接头序列，连接产物通过重亚硫酸盐处理将未甲基化修饰的胞嘧啶C转变为尿嘧啶U,进而通过接头序列介导的在这项研究中，研究人员首先优化了基于转座酶的全基因组重亚硫酸盐测序(transposase-based tagmentation bisulfite sequencing)技术，实现了微量细胞(100个细胞)的全基因DNA甲基化测

一、精准简化基因组甲基化测序(RRBS+oxRRBS)技术概述5-羟甲基化胞嘧啶(5hmC)是甲基化胞嘧啶(5mC)去甲基化过程中的中间产物，由TET家族酶类通过氧化甲基化胞嘧易基因研发cfDNA-RBS技术，特异性捕获CCGG位点两端的DNA,通过亚硫酸盐测序，实现高深度，单碱基分辨检测CG位点甲基化信息。DNA起始量仅需5ng,是目前肿瘤甲基化标志物检测研究的优选技

简化基因组甲基化测序实验步骤大致如下：1.利用限制性内切酶对基因组进行酶切2.文库构建，包括末端修复、加A尾和接头3.片段选择，以人为例，一般是选择40-220bp的片段4.重亚硫酸盐简化甲基化测序(Reduced representation bisulfite sequencing,RRBS)主要针对CpG富集的区域的甲基化研究方法，它依据限制性内切酶酶切手段将DNA酶切成小片段，选

Tompa团队利用甲基化敏感的限制性内切酶(一种异裂酶)将拟南芥的基因组DNA分离成具有甲基化和/或未甲基化CpG位点的片段，将这些片段杂交到定制芯片上，在2002年获得了第一个全基因组如使用RLGS研究98例人原发性肿瘤中1184个未选择的CpG岛基因组DNA甲基化水平，RLGS可以依据甲基化敏感限制性内切酶(MRE)靶向潜在CpG位点，该MRE可以选择性酶切CpG位点基因组富集区域或