影响pcr特异性的因素有哪些,PCR技术实验步骤

影响pcr特异性的因素有哪些,PCR技术实验步骤

一、影响PCR特异性的因素：①退火步骤的严格性：提高退火温度可以减少不匹配的杂交，从而提高特异性。②减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸。③5、影响PCR实验结果的因素有哪些？一、温度循环参数：1.模板变性温度变性温度是决定PCR反应中双链DNA解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链DNA模板，PCR也就不会启动。2.引物退火温度退火温度决

ˇ△ˇ 2.引物退火温度退火温度决定PCR特异性与产量；温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。PCR反应的特异性决定因素为：①引物与模板DNA特异正确的结合；②碱基配对原则；③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；④靶基因的特异性与保守性。其中引物与模

退火温度对PCR的特异性有较大影响。4. 讨论影响PCR反应的因素和taq酶和所扩增的片段长短有关。pcr的延伸就是当引物结合到模板上时，会在聚合酶的作用下进行PCR 反应的影响因素包括以下几个方面：1. DNA 模板的质量和纯度：如果DNA 模板含有污染物、酶、RNA

＼　＿　／ 影响PCR特异性的主要因素在氨基酸序列上与大肠杆菌dna聚合酶有38是一致的包括对dntp结合引物与模板作用区均存在于taqtaq酶具有依赖dna合成的53外切酶活性因此模板上有一段退引物的设计和选择对PCR的成功至关重要。不合适的引物设计可能导致低特异性或效率低的PCR反应。引物的长度、Tm值（解离温度）和GC含量等因素必须在选择引物时加以考虑。PCR反应条件

⊙﹏⊙‖∣° (2)酶及其浓度：催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100μl时),浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。3)dNTP的质量与浓度：dNTP应为50～200μm40、影响PCR反应的因素有哪些？PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。41、影响P