菌落pcr假阳性现象及原因,长了菌但是菌落pcr没阳性

菌落PCR放菌太多也会P不出来 2023-08-30 14:42 360 墨鱼

菌落PCR放菌太多也会P不出来

菌落pcr假阳性现象及原因,长了菌但是菌落pcr没阳性

(四)假阳性解决途径由于PCR的敏感性和效率特别高，所以少量的扩增产物污染标本或反应管即可出现假阳性。尤其是PCR扩增产物和质粒分子很容易造成实验室的污染，导致假阳性现象之所以出现假阳性，其本质是样本被外源性阳性核酸(质粒或者靶标核酸气溶胶)污染所致。下面就PCR实验室出现假阳性(核酸污染)的具体原因及应对措施分析如下：一、试验室经常出现核酸

其PCR扩增是不会成功的。二、假阳性出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种

重组率不同(Lc的重组率依次为100%、78%、78%,Fd的重组率依次为90%、66%、66%,Lc与Fd同时插入的重组率依次为90%、50%、50%).菌落PCR法鉴定的重组率偏高，存在假阳性现象.对照PC菌落PCR法鉴定的重组率偏高，存在假阳性现象。对照P(、R提示，XL一一blue菌本身可能是导致假阳性扩增的原因。结论用菌落PCR法不能准确鉴定噬菌体抗体库的重组

＞ω＜ 2. 平板长菌，挑的单克隆菌落能摇起来，但菌液PCR没有条带？3. 平板长菌，挑的单克隆菌落能摇起来，但菌液PCR与阳性对照的大小不对？4. 平板长菌，挑的单克隆菌落能摇起来，但菌液PCR出现多但是由于PCR是一个级联放大的过程，所以即使菌落中不含有目标片段，而是菌落表面沾有一部分之前连接，转化中用的目标DNA，也会导致PCR获得扩增条带，从而误认为这

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