菌落PCR放菌太多也会P不出来,转化后长菌全是假阳性

菌落PCR放菌太多也会P不出来,转化后长菌全是假阳性

∪▽∪ 比如能看到菌落沾到了牙签尖/枪头顶端即可，在无菌水中旋转溶解后水肉眼可见的浑浊了即可。或者，选择一个耐受能力强的PCR Master Mix,可以在挑菌操作上不那么严格，也能得到完美菌落PPCR 实验中常遇见一些令人头疼的小问题可能就是实验设计或者实验过程中一个小小的条件没有到位就导致预期的实验结果出不来br br PCR 总是P 不出往往有3 个原因来看看究竟是

培养时间多长？Amp抗性筛选，容易出现卫星菌落，严格控制时间在12-16h，尽量多挑几个菌落PCR。3、诱导不出，是很正常的，需要摸索最佳诱导条件，可以参考文献具体流程就算了吧，大差不差的，我们是10微升的体系分装完后直接白枪头挑单菌落与体系内液体充分吹打混匀之后跑Pcr 直接对于我这几天踩的坑进行总结，各位合理食用1 白枪头沾取单菌的

菌落正常菌落pcr没有条带：1.可能是空载，没有目标条带2.可能是假阳性3.可能是pcr的原因菌没裂解模板没释放，可以适当延长预变性时间至10min,让菌裂解释放出模板菌p正常，测序是空载1，挑菌进500ul的ddH2O，充分混匀，不需煮，取1ul做模板，你之前直接挑菌，模板有可能过多，也会p不出带；（也可以先把克隆挑到1-5ml的LB中摇菌1小时，直接取1ul来

≡(▔﹏▔)≡ 可以考虑提质粒后再验证，因为有些菌可能是低拷贝或者其他原因，导致难以菌液PCR（具体没研究，不过确实我要对筛选出来的菌株进行16S 鉴定，所以做了菌落PCR。但是结果是，总共12株菌，只有3株有很亮的条带，其余9株都没有条带。请问这是为什么？该如何解决？我们对这些菌株做过生理检

没连进去呗可能是最初的PCR就没扩增出来你要的条带调整下退火温度或者直接连T载体测序或者换对引物为什么每次做转化后菌落PCR有带，但是提质粒后就P不出。1个回答2023-01-20 PCR做不出我一般都先试试更高或者更低的温度高保真酶P不出来但是Taq能P出来的话，也可以直接用Taq的