菌落pcr会出现假阴性吗,长菌但是菌落pcr没有带

菌落pcr会出现假阴性吗,长菌但是菌落pcr没有带

物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性；退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结2 如果你的菌中质粒拷贝数很低，基因组比较复杂（如农杆菌），有时会出现假阴性（不能P出带），这时。可以提质粒后在PCR验证。

我理解，这样的直接以细菌为模板进行PCR反应，特别是前两种，适用于大量的筛选和验证，由于加入了细菌本身的其他物质以及难免引入的培养基成分，可能会对PCR反应造成干扰，假阳性假PCR假阳性。假阴性的概率都很高。菌液的问题在于盐！盐会干扰PCR。如果用菌液的话，可以用水洗涤离心几次，然后重悬于水，就可以了。题外话：最近菌落PCR,阴性和

PCR结果也可能出现假阴性，在模板的制备中可能出现的原因有很多，但在实验时我们发现假阴性最多时是由于试剂和标本的反复冻融。如：试剂中蛋白酶K若反复冻融5次变性对PCR 扩增来说相当重要，如，变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性；退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率，退火温度过高影响引物与模板的

其中任一环节出了问题都会引起结果的假阴性。这些都是试剂质量的问题，因此选用高质量的PCR试剂非常重要。三、核酸模板问题核酸模板质量问题是制约PCR最重要的6.物理原因：变性对pcr扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性；退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引

╯﹏╰ 离心机的质量或使用不正确，造成离心标本模板没有分离出来造成假阴性，窃以为这是最易被忽视的问题。其时离心机使用问题不仅在PCR,在整个检验工作中都是最易被忽临床PCR常见问题1.假阳性问题方法学问题：靶基因序列特异性、引物错配、非特异性扩增污染问题：样本污染、产物污染、产物污染解决办法：严格区分试验区域及人员培训，使用UNG技术2.